Когда и как правильно сдавать анализ кала на хеликобактер? Анализ кала на Helicobacter pylori Где сдать анализ на бактерию хеликобактер

[09-053 ] Helicobacter pylori, ДНК [реал-тайм ПЦР]

1025 руб.

Заказать

Выявление Helicobacter pylori (H. pylori), в ходе которого с помощью метода полимеразной цепной реакции в реальном времени (РТ-ПЦР) определяется генетический материал (ДНК) микроорганизма в образце биоматериала.

Синонимы русские

Хеликобактер [полимеразная цепная реакция в режиме реального времени].

Синонимы английские

H. pylori, Helicobacter pyloridis, DNA .

Метод исследования

Полимеразная цепная реакция в режиме реального времени.

Какой биоматериал можно использовать для исследования?

Биоптат, кал.

Общая информация об исследовании

H. pylori – это грамотрицательная подвижная бактерия, устойчивая к воздействию соляной кислоты и способная колонизировать слизистую оболочку желудка и двенадцатиперстной кишки. Как правило, первичное инфицирование происходит в детстве и протекает бессимптомно, но у некоторых людей с течением времени приводит к развитию серьезных заболеваний. H. pylori обнаруживается в подавляющем большинстве случаев гастрита и язвенной болезни и, кроме того, многократно увеличивает риск развития аденокарциномы и В-клеточной лимфомы желудка. Современная диагностика этих заболеваний невозможна без точной и быстрой идентификации H. pylori.

H. pylori может быть выявлена с помощью нескольких методов. В настоящее время доступны неинвазивные методы диагностики, обладающие преимуществом простоты и безопасности взятия образца для исследования (исследование кала), что имеет особое значение при обследовании пожилых людей, детей, а также в условиях амбулатории.

Helicobacter очень чувствительна к воздействию желчных кислот и пониженного содержания кислорода, поэтому при пассаже химуса через двенадцатиперстную и толстую кишку количество бактерий значительно снижается. Кроме того, активные спиралевидные формы бактерии претерпевают морфологические изменения, обеспечивающие большую устойчивость в неблагоприятных условиях. Результатом этого становится низкая концентрация микроорганизмов и преобладание кокковых форм в кале, что следует учитывать при выборе лабораторного метода исследования этого биоматериала. Среди многих неинвазивных методов особое место занимает исследование с помощью полимеразной цепной реакции в режиме реального времени.

Полимеразная цепная реакция в реальном времени (РТ-ПЦР) – это метод молекулярной диагностики, позволяющий выявлять в биологическом материале (например, в кале) фрагменты генетического материала (ДНК) возбудителя инфекции. РТ-ПЦР характеризуется очень высокой чувствительностью (93-95 %), что является преимуществом при анализе кала. В отличие от бактериологического посева, это исследование позволяет выявлять как спиралевидные, так и кокковые (некультивируемые) формы H. pylori. Из-за того что в реакции выявляется ДНК микроорганизма, исследование не применяется для дифференциальной диагностики текущей инфекции или инфекции в анамнезе – результат анализа будет положительным еще некоторое время после полной эрадикации H. pylori, что обусловлено выявлением фрагментов разрушенных ДНК микроорганизма.

На слизистой оболочке желудка могут также присутствовать другие представители рода Helicobacter (H. suis, H. baculiformis). Несмотря на то что их значение в развитии заболеваний ЖКТ еще до конца не установлено, они играют определенную роль при идентификации H. pylori. Так, например, лабораторные исследования, основанные на выявлении общего для всех видов Helicobacter антигена, будут характеризоваться большим числом ложноположительных результатов исследования на H. pylori за счет выявления других видов (как в случае с ELISA). Это практически исключено в исследовании с помощью РТ-ПЦР, так как реакция основана на выявлении специфического для H. pylori фрагмента ДНК.

Диагностика хеликобактериоза у детей представляет определенные трудности. Это связано с невыполнением ребенком дыхательного маневра при использовании уреазного дыхательного теста, а также необходимостью наркоза при использовании инвазивных методов. Исследование кала с помощью РТ-ПЦР является хорошей альтернативой этим методам и поэтому может быть с успехом применено в педиатрической практике.

Высокое содержание неорганических солей (фосфатов, кальция), ферментов ЖКТ, полисахаридов, желчных кислот и солей, растительных волокон, слизи и других компонентов кала может ингибировать РТ-ПЦР, поэтому подготовка к тесту требует должного внимания со стороны пациента и врача. Интерпретация результата анализа проводится с учетом дополнительных лабораторных и инструментальных данных.

Для чего используется исследование?

Для диагностики заболеваний, вызванных H. pylori:

• атрофического или антрального гастрита;
• язвы желудка и двенадцатиперстной кишки.

Когда назначается исследование?

• При подозрении на гастрит или язвенную болезнь у детей и пожилых людей.
• При невозможности использования инвазивных методов идентификации H. pylori у пациентов любого возраста.

Что означают результаты?

Референсные значения: отрицательно.

Положительный результат:

• текущая H. pylori-инфекция;
• H. pylori-инфекция в анамнезе.

Отрицательный результат:

• отсутствие H. pylori-инфекции.

Что может влиять на результат?

• Присутствие в образце кала крови, желчи, избытка неорганических солей и других компонентов может приводить к получению ложноотрицательного результата.
• Лечение препаратами тетрациклина, пенициллина (аминопенициллины), макролидами (кларитромицин, азитромицин) и метронидазолом может приводить к получению ложноотрицательного результата.



Важные замечания

Современные диагностические методы позволяют узнать многое о состоянии здоровья человека по его биологическим жидкостям: крови, моче, фекалиям.

Исследуя кал, можно узнать, поселилась ли в организме , способная вызывать гастриты, и провоцировать онкопатологию.

Кал на наличие или отсутствие данного микроба можно изучать тремя способами: культуральным, иммунологическим, и наиболее достоверным и распространённым – методом полимеразно-цепной реакции (ПЦР).

Сама бактерия крайне редко встречается в фекалиях в своей привычной S-образной форме целиком. Толстый кишечник и каловые массы не являются благоприятной средой для микроорганизма, поэтому, попадая в них, она может принимать круглую кокковую форму, изредка встречаясь в испражнениях именно в таком виде.

Культуральный метод подразумевает под собой посев части исследуемого материала на питательную среду, в которой бактерия будет хорошо себя чувствовать и начнёт размножаться.

Таким образом:

Происходит рост колоний, которые анализируются, окрашиваются специальными реактивами и исследуются под микроскопом. Данным способом в прямом смысле выращивают патогенные микробы с целью их дальнейшего изучения.

Кроме обнаружения самой бактерии, метод позволяет установить чувствительность патогена к тому или иному антибиотику. Если при добавлении лекарственного препарата рост колонии сохраняется – Н.руlori устойчива к антибактериальному средству, а если микроорганизмы погибают – имеет смысл назначить данный препарат пациенту с целью лечения и эрадикации, бактерии чувствительны к нему.

Культуральный способ весьма достоверен, но только в том случае, если во взятом биологическом материале обнаружена S-форма микроба. Метод имеет свои недостатки, и по этой причине не слишком распространён:

• Сроки исследования занимают от 6 до 12 дней
• Дорогостоящие среды для высевания хеликобактерий
• Специфические условия для сред, обеспечивающие рост колонии, которые сложно воспроизвести в лаборатории
• Редкая встречаемость S-образных форм бактерии в испражнениях, пригодных для роста в питательных условиях (кокковые формы не исследуют)

Определение антигена хеликобактер пилори в кале иммунологическим методом

Фекалии пациента могут быть подвергнуты иммунологическому исследованию, которое позволяет выявить уже не сам микроорганизм, а его части – антигены.

Для этого:

Используются специальные антитела, направленные на обнаружение чужеродного антигена – частей бактерии, продуктов её жизнедеятельности, генетического материала.

Взаимодействуя с чужеродным агентом, антитела образуют специфический комплекс, который и определяется иммуно-ферментным анализом.

Данный способ изучения кала редко применяется в России, не многие лаборатории оснащены необходимыми реактивами и необходимыми тестами.

Но в перспективе возможно включение данного способа обнаружения хеликобактер в качестве скрининг-тестов: исследования широких групп населения на заражённость бактерией.

Анализ кала ПЦР на хеликобактер пилори

Это наиболее распространённый метод исследования фекалий на данную бактерию, обладающий высокой точностью.

Суть способа в следующем:

Из биологического материала пациента выделяется участок ДНК бактерии, который затем многократно искусственно дублируется на специальном аппарате, так происходит восстановление гететического кода Н.руlori

Когда геномный фрагмент микроба достигает достаточных размеров, его сравнивают с эталонным и делают вывод об исследуемом микроорганизме: хеликобактер ли это или другой патоген.

Положительный ПЦР анализ означает наличие в организме человека хеликобактерной инфекции: бактерия присутствует в желудке, ее фрагменты ДНК обнаружены в кале и совпали с эталонными.

Достоинства ПЦР-метода:

• Высокая точность: даже незначительного количества генетического материала достаточно для исследования с большим процентом достоверности, приближающимся к 99%.
• Быстрота исследования. 2 суток достаточно для анализа, но существуют экспресс-способы, позволяющие установить диагноз за несколько часов.
• Безболезненность. Способ атравматичен, неинвазивен. Позволяет обследовать маленьких детей, пожилых, ослабленных пациентов, которым противопоказана ФГДС с биопсией и другие эндоскопические манипуляции.
• Для точного результата не обязательно обнаружение ДНК-фрагментов именно S или спиралевидных форм, части кокковых микробов (наиболее встречающихся в испражнениях) тоже подходят для анализа.

У ПЦР-диагностики значительно больше плюсов, чем минусов. К недостаткам можно отнести:

• Относительно высокую стоимость анализа.
• Сохранение фрагментов ДНК микроба в фекалиях и после эрадикации. Даже если лечение успешно пройдено и бактерия отсутствует в организме, ещё спустя какое-то время фрагменты ДНК обнаруживаются в биологическом материале и стул тест на хеликобактер может дать положительный результат. Поэтому с целью контроля излеченности рекомендуется ПЦР-диагностика не ранее, чем через 1 месяц после окончания терапии.
• Специальная дорогостоящая высокотехнологичная аппаратура, для работы на которой необходим подготовленный и обученный персонал.

Анализ кала на антиген хеликобактер пилори инвитро

Все диагностические исследования, проводимые с фекалиями пациента, относятся к манипуляциям ин витро – «в пробирке», «в стекле», вне организма человека.

Они обладают достаточно высокой точностью и информативностью, если преследуют цель обнаружения микроба.

Но не все процессы, происходящие «ин виво» — внутри человеческого организма, можно с той же достоверностью воссоздать «ин витро». К примеру, определение чувствительности к антибиотикам, анализируемую культуральным методом.

При исследовании антибактериальной чувствительности колоний микробов на питательных культурах, было выявлено, что самые подходящие препараты для бактерий ин витро, «не работали», оказывались малоэффективными при лечении пациента.

Результаты исследований чувствительности бактерии к антибиотикам «в пробирке» не всегда точны.

Как сдать анализ кала на хеликобактер пилори

Достоверность анализа кала на хеликобактер

ПЦР — диагностика фекалий наиболее достоверна из всех трех вышеописанных способов, она в какой-то степени уступает лишь биопсийному эндоскопическому исследованию.

ПЦР-анализ кала редко дает ложноположительные результаты, обладает высокой специфичностью, позволяет исследовать ДНК-материал часто встречаемых кокковых форм хеликобактерий в испражнениях.

Достоверность культурального и иммунологического метода ниже, чем ПЦР. Эти методы «грешат» появлением ложноположительных результатов, но в совокупности с другими способами выявления Helicobacter pylori, они являются прекрасным подспорьем для постановки диагноза.

Антиген H.pylori в фекалиях

В случае, если в кале обнаружен антиген хеликобактер пилори либо ДНК-фрагмент исследуемого микроорганизма, это означает, что:

• Человек инфицирован Н.руlori.
• Эрадикационная терапия недостаточно эффективна и микроб не исчез из слизистой оболочки ЖКТ.
• Прошло меньше месяца после терапии и в кале сохраняются антигены умертвлённых патогенов.

Чтобы исключить ложноположительный результат после прохождения схемы антихеликобактерной терапии (когда анализ положительный, а организм человека не содержит Н.рylori), следует не торопиться узнавать эффективность лечения, а выждать не менее одного месяца после его окончания.

Если проведено успешно, спустя 1 месяц после эрадикации в кале не выявляются антигены и ДНК микроба. Результат обследования – отрицательный.

В случае выявления антигенов при первичном анализе, врач порекомендует пациенту пройти курс специальной терапии, направленной на уничтожение Н.руlori.

Классификация методов выявления инфекции Нelicobacter pylori представлена в таблице.

Инвазивные методы требуют проведения эндоскопического исследования (ФЭГДС) с биопсией и дальнейшим изучением гастробиоптатов. Неинвазивные методы эндоскопического исследования не требуют.

Гистологический метод

Гистологический метод исследования биоптатов СОЖ — микроскопия окрашенных различными способами (гематоксилин-эозином, по Гимзе, толуидиновым синим, по Вартину-Старри) мазков-отпечатков гастробиоптатов. Этот метод позволяет определить выраженность воспаления СОЖ, наличие атрофии, кишечной метаплазии и наличие (степень обсемененности) НР.

Быстрый уреазный тест (Хелпил-тест)

Быстрый уреазный тест (Хелпил-тест) — определение HР по уреазной активности микроорганизма в биоптатах СОЖ. Helicobacter pylori продуцирует уреазу, под влиянием которой происходит гидролиз мочевины с образованием иона аммония. При этом увеличивается рН среды, что можно зафиксировать с помощью изменения цвета индикатора. Гастробиоптаты помещают в раствор, содержащий мочевину и индикатор, изменение цвета которого косвенно свидетельствует о наличии HР.

Молекулярно-генетический метод — ПЦР в биоптате

Молекулярно-генетический метод исследования биоптатов СОЖ с помощью ПЦР позволяет выделять высокопатогенные и низкопатогенные штаммы HР.

Бактериологический метод

Бактериологический метод исследования биоптатов СОЖ: культуральное исследование и определение чувствительности HР к антибиотикам перед терапией первой линии важно проводить в регионах с высокой резистентностью к кларитромицину (более 15-20%), если планируется использовать стандартную трехкомпонентную эрадикационную терапию, одним из компонентов которой является кларитромицин. Бактериологический метод с определением чувствительности к антибиотикам также необходимо применять при неэффективности эрадикационной терапии второй линии.

Исследование кала на наличие антигена HР (ИФА)

ИФА (особенно с применением моноклональных антител) выявления антигена HР в кале является высокочувствительным и специфическим методом как для первичной диагностики инфекции НР, так и для контроля результата лечения.

Серологический метод

Серологический метод (ИФА) — определение антител IgG к HР в сыворотке крови — простой и доступный метод первичного скрининга инфекции. Учитывая, что антитела к HР сохраняются в течение многих месяцев после эрадикации микроорганизма, использование серологического метода не рекомендуется для оценки эффективности проведения эрадикационной терапии.

Уреазный дыхательный тест с 13С-мочевиной

Уреазный дыхательный тест — исследование состава выдыхаемого воздуха после приема раствора мочевины, меченной изотопом углерода (13С). При наличие в желудке обследуемого HР мочевина под действием уреазы, продуцируемой бактерией, подвергается гидролизу до NH4+ и HCO3- с последующим образованием из HCO3- углекислого газа, который, попадая в кровоток, затем выделяется через легкие и может быть определен спектрометром в выдыхаемом воздухе. Этот тест может использоваться как для первичной диагностики HР, так и для оценки эффективности эрадикации.

На фоне инфекции Helicobacter pylori развиваются такие воспалительные заболевания желудочно-кишечного тракта, как язва желудка или двенадцатиперстной кишки, эрозивный гастрит, гастродуоденит.

Анализ кала на хеликобактер пилори – это достоверное доказательство наличия в организме человека бактерии, вызывающей язвенную и множество других болезней пищеварительного тракта человека. Такой анализ является прямым доказательством, если обнаруживается либо сам хеликобактер, либо его ДНК. Достоверность анализа самая высокая изо всех известных.

От правильности подготовки и сбора материала зависит результат. Присутствия человека не требуется, достаточно вовремя доставить правильно собранный материал.

Подготовка к сдаче анализа

При подготовке нужно неукоснительно соблюдать такие правила:

Для подготовки достаточно 3-х дней. В это время желательно отказаться от всех лекарств (если сделать этого нельзя, сообщить врачу названия и дозировку). Нужно сократить употребление рыбы и мяса, готовить их на пару или варить. Лучшая еда на это время – каши и кисломолочные продукты, овощные и фруктовые пюре, слабые супы, нейтральные натуральные соки (яблочный, белый виноградный), компоты, морсы, слабый чай, отвар шиповника.

Подготовка тары

Некоторые лаборатории выдают тару для анализа, включая их стоимость в общую цену. Это лучший вариант. Емкость для кала можно приобрести в аптеке, стоимость несколько рублей. Контейнер продается в стерильном состоянии, его нельзя открывать, протирать или промывать. К крышке прикреплена пластиковая ложечка, которой материал набирается.

В самом крайнем случае можно воспользоваться стеклянной банкой с хорошо подогнанной крышкой (из-под детского питания). Банку нужно хорошо вымыть, а затем прокипятить вместе с крышкой и ложкой или другим предметом, которым будет набираться кал. Если на посуде останутся бактерии, анализ окажется неверным.

Сбор материала

Собирать материал из унитаза или памперса нельзя. Унитаз нужно накрыть чистым полиэтиленовым пакетом, а вместо памперса (ребенку или лежачему больному) подстелить клеенку. Допускается забор материала из чистого горшка.

Контейнер заполняется не более чем на одну треть, плотно закрыть крышкой. К посуде прикрепить направление или написать на этикетке (разборчиво) фамилию и имя пациента, год рождения.

Как и сколько можно хранить материал?

Контейнер с материалом доставляется в лабораторию как можно раньше, оптимально в день забора. Если возможности срочной доставки нет, допускается хранение в холодильнике не более 2-х суток при температуре не выше +4 ° С. При необходимости более длительного хранения материал однократно замораживают при температуре -20 ° С.

Методики анализа и расшифровки показателей

Биологический материал можно исследовать разными способами.

Другие способы выявления хеликобактера

При обследовании используют обычно несколько методов, чтобы окончательно убедиться в наличии или отсутствии хеликобактера:

Набор диагностических тестов зависит от оснащенности лечебного учреждения. «Золотым стандартом» считается гистологическое исследование. Однако положительный результат хотя бы двух разных тестов считается достаточным для того, чтобы подтвердить присутствие бактерии.

Что делать при положительном анализе?

Как можно скорее посетить гастроэнтеролога, чтобы выяснить, нужно ли проводить эрадикацию (удаление из организма) бактерии. Это неоднозначный процесс, есть противопоказания, консультация врача необходима.

наряду с дыхательным тестом самый надежный метод диагностики текущей хеликобактерной инфекции.

Синонимы: helicobacter pylori antigen, EIA.

Что такое - хеликобактер пилори?

Патогенный микроорганизм (Н. pylori) вызывает следующие заболевания:

• - воспаление слизистой оболочки желудка
• хронические дуодениты - воспаление 12-ти перстстной кишки
• (в 70% случаев) и двенадцатиперстной кишки (в 90% случаев)
• хеликобактериоз
• pак желудка
• лимфому желудка

Заражены 70% населения, каждый третий!

Постоянное присутствие бактерии в желудке сопровождается следующими симптомами:

• боль в области желудка после еды или перед приемом пищи
• периодическая тошнота и даже рвота
• чувство тяжести в желудке
• изжога и привкус кислого во рту
• неприятный запах изо рта

Данные симптомы не просто снижают качество жизни, заставляют принимать длительное время медикаменты, но и могут привести к раку желудка!

Хеликобактер пилори способна «запускать» и другие заболевания, которые на первый взгляд не связаны с желудком - местом постоянного обитания бактерии. Например, - тяжелое заболевание со снижением числа в и высокой вероятностью кровотечения.

Поэтому правильная диагностика текущей инфекции H.pylori крайне важна!

Преимущества

• высокая специфичность и чувствительность (99%)
• рекомендован как метод выбора у детей и взрослых
• процедура проста как для пациента, так и для медицинского персонала
• низкая цена и доступность
• быстрое получение результата
• без противопоказаний, осложнений и побочных эффектов

Недостатков у метода нет.

Показания

• диагностика инфицированности хеликобактер пилори и контроль успешности лечения
• симптомы диспепсии - боль или чувство дискомфорта (тяжесть, переполнение, раннее насыщение) в области желудка (под ложечкой)
• симптомы хронического гастрита, язвенной болезни желудка и двенадцатиперстной кишки, гастроэзофагеальной рефлюксной болезни (ГЭРБ)
• через 4-6 недель после окончания лечения хеликобактерной инфекции для контроля излеченности

Тест на антиген хеликобактер пилори в кале не рекомендован при отсутствии симптомов!

Принцип теста

С калом выделяются частички микробной стенки H.pylori, которые реагируют с соответствующим моноклональным антителом, что приводит к изменению окраски цветового индикатора.

Подготовка

• за 2 недели до анализа на антиген H.pylori в кале нужно перестать принимать препараты висмута (Де-Нол, Улькавис), ингибиторы протонной помпы (омепразол, пантопразол, лансоопразол), антибиотики (любые)
• не принимать препараты разжижающие стул
• жидкий стул нельзя исследовать

Выполнение

Не сегодняшний день антиген хеликобактер пилори в стуле можно определять в условиях лаборатории или дома при помощи экспресс-тестов.

Специальный пластиковый контейнер на 1/3 заполняют калом, собранным в химически чистую посуду (не из унитаза, а из горшка). Контейнер помещают в пакет и относят для исследования в лабораторию. Образец можно хранить при температуре 2-8С до 24 часов.

В домашнем экспресс-тесте кал собирают в пробирку с растворителем, тщательно взбалтывают и несколько капель наносят в окно тест-касеты. Если появились две полоски — результат положительный, если одна на уровне контроля — отрицательный, если одна напротив теста или ни одной — тест не действителен. Время анализа 10 минут.

Норма

• в норме антиген к хеликобактер пилори в кале не выявлен или отрицательный результат

Некоторые производители указывают также “серую зону” — когда результат невозможно оценить как положительный/отрицательный. В таком случае анализ рекомендовано повторить через 2 недели.

Дополнительные исследования

Расшифровка результата

1. положительно

• H. pylori находится в организме, что указывает на острую или хроническую инфицированность
• бактерия еще не полностью элиминирована из организма, не соблюдена пауза 4 недели между окончанием лечения и анализом

2. отрицательно

• отсутствие инфекции хеликобактер пилори
• полное излечение

P.S. Статья написана согласно рекомендациям по диагностике хеликобактерной инфекции - American Gastroenterology Association (AGA), the American College of Gastroenterologists (ACG), Infectious Diseases Society of America (IDSA)/the American Society for Microbiology (ASM).

Исследование антигена хеликобактер пилори в кале was last modified: Ноябрь 24th, 2017 by Мария Бодян